CRISPR/CAS 9

CRISPR  (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) sind, sich wiederholende DNA Abschnitte. Das CRISPR/Cas-System ist Teil des Genoms von Prokaryoten und wurde erstmals in Escherichia coli (E. coli) identifiziert [1]. Das CRISPR/Cas System enthält DNA Abschnitte viraler DNA (Spacer), welche nach einer Infektion des Bakteriums, durch den Virus, in den CRISPR Locus integriert werden. Die Spacer werden anschließend in CRISPR-RNA (crRNA) transkribiert. Die crRNAs binden anschließend an trans-aktivierende crRNAs (tracrRNAs) und initiieren  die Spaltung und Eliminierung von pathogener DNA. Die Spaltung erfolgt durch das CRISPR-assoziierte Protein (Cas), eine Endonuklease. Somit ist das CRISPR/Cas-System Teil des adaptiven Immunsystems der Prokaryoten [2].

 

 

Abbildung Nr. 1: CRISPR Mechanismus – herbeigeführte Immunität in Bakterien

Anwendungen

Die Erkennung und Spaltung der Ziel-DNA, durch die Endonuklease erfolgt nur, wenn die Sequenz in unmittelbarer Nähe zu einem sogenannten "Protospacer adjacent motif" (PAM) liegt. Der Weg der Zielidentifikation sorgt für ein hochpräzises „Targeting“. Die beschriebene Struktur ermöglicht es, das CRISPR/Cas-System für spezifische biotechnologische Anwendungen zu modifizieren. Somit kann CRISPR/Cas dazu verwendet werden, praktisch jede DNA-Sequenz, durch Neugestaltung der crRNA, zu spalten. Dies macht CRISPR/Cas9 zu einem vielseitigen Genom-Editing-Tool für die genetische Veränderung des Ziel-Genoms.

CRISPR/Cas9 ist den herkömmlichen Genom-Editing-Anwendungen, wie z.B. Zinkfinger-Nukleasen (ZFNs) und Transkriptionsaktivator-ähnlichen Effektor-Nukleasen (TALENs) überlegen, da es einen einfachen und effizienten Ansatz zur Manipulation des Genoms bietet [3]. Seine Vorteile werden in vielseitigen wissenschaftlichen Bereichen, wie z.B. der Medizin und Biologie, Pharmakologie und Biotechnologie eingesetzt [4].

 

 

 

Abbildung Nr. 2 Illustration der Cas9 Nuclease

 

http://dharmacon.gelifesciences.com/gene-editing/crispr-cas9/crispr-guide-rna/

Produkte

Enzyme

Cat. No.

Product Name

Size

Price

Z03386-10

GenCrispr Cas9 Nuclease

10 μg (0.2mg/ml)

46,13€

Z03386-50

GenCrispr Cas9 Nuclease

50 μg (5×10μg)(0.2mg/ml)

143,70€

Z03385-50

GenCrispr Cas9-C-Nuclease

50 μg (1mg/ml)

164,7€

Z03385-100

GenCrispr Cas9-C-Nuclease

100 μg (4mg/ml)

228,89€

Z03388-50

GenCrispr Cas9-N-NLS Nuclease

50 µg (1mg/ml)

164,70€

Z03388-100

GenCrispr Cas9-N-NLS Nuclease

100 µg (4mg/ml)

228,89€

Z03389-50

GenCrispr NLS-Cas9-NLS Nuclease

50 µg (1mg/ml)

164,70€

Z03389-100

GenCrispr NLS-Cas9-NLS Nuclease

100 µg (4mg/ml)

228,89€

Z03390-100

GenCrispr NLS-Cas9-D10A Nickase

100 µg (4mg/ml)

319,89€

Z03390-10

GenCrispr NLS-Cas9-D10A Nickase

10 µg (1mg/ml)

72,71€

Z03390-50

GenCrispr NLS-Cas9-D10A Nickase

50 µg (1mg/ml)

244,89€

Z03393-50

GenCrispr NLS-Cas9-EGFP Nuclease

50 µg (1mg/ml)

164,70€

Z03393-100

GenCrispr NLS-Cas9-EGFP Nuclease

100 µg (3mg/ml)

228,89€

 

 

Kits

Cat. No.

Product Name

Size

Price

L00688-25

GenCrispr Mutation Detection Kit

25 reactions

195,89 €

L00688-100

GenCrispr Mutation Detection Kit

100 reactions

405,00 €

L00689-30

GenCrispr sgRNA Screening Kit

30 reactions

180,89 €

L00689-100

GenCrispr sgRNA Screening Kit

100 reactions

405,00 €

L00690-25

High-Efficiency sgRNA-Cas9-GFP Plasmid (linear) Assembly Kit

25 reactions

405,00 €

L00690-10

High-Efficiency sgRNA-Cas9-GFP Plasmid (linear) Assembly Kit

10 reactions

217,89 €

L00691-25

High-Efficiency gRNA-Cas9-Puro Plasmid (linear) Assembly Kit

25 reactions

405,00 €

L00691-10

High-Efficiency gRNA-Cas9-Puro Plasmid (linear) Assembly Kit

10 reactions

217,89 €

L00692-25

High-Efficiency gRNA-Cas9-GFP Plasmid (linear) Assembly Kit

25 reactions

354,89 €

L00692-10

High-Efficiency gRNA-Cas9-GFP Plasmid (linear) Assembly Kit

10 reactions

174,89 €

L00693-25

High-Efficiency gRNA-Cas9-GFP Plasmid (linear) Assembly Kit

25 reactions

354,89 €

L00693-10

High-Efficiency gRNA-Cas9-Puro Plasmid Assembly Kit

10 reactions

174,89 €

L00694-50

 High-Efficiency gRNA-Cas9-Puro Plasmid Assembly Kit

50 reactions

885,00 €

L00694-20

GenCrispr sgRNA Synthesis Kit

20 reactions

384,53 €

 

 

 

 

 

 

 

 

 

References

1. Barrangou R (2015). "The roles of CRISPR-Cas systems in adaptive immunity and beyond". Current Opinion in Immunology32: 36–41

http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0952791514001563

2. Gaj, T., Gersbach, C. A., & Barbas, C. F. (2013). ZFN, TALEN, and CRISPR/Cas-based methods for genome engineering. Trends in biotechnology31(7), 397-405.

http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167779913000875

3. Barrangou, R., & Doudna, J. A. (2016). Applications of CRISPR technologies in research and beyond. Nature biotechnology34(9), 933-941.

https://www.nature.com/nbt/journal/v34/n9/abs/nbt.3659.html

4. Crauciuc, Andrei, et al. "Development, Applications, Benefits, Challenges and Limitations of the New Genome Engineering Technique. An Update Study." Acta Medica Marisiensis 63.1 (2017): 4-9.

https://www.degruyter.com/view/j/amma.2017.63.issue-1/amma-2017-0007/amma-2017-0007.xml